Начальные методы клеточной биологии: читать книгу онлайн полностью и бесплатно
Автор: Князев Евгений, Скворцов Дмитрий, Антипова Надежда, Черткова Рита
Шрифт:
• Полная питательная среда, 20 мл.
• Раствор 0,25 %-ный трипсина, 5 мл.
• Раствор PBS, 50 мл.
• Пробирки для центрифугирования.
• Пробирки для криоконсервации с завинчивающейся крышкой объемом 2 мл, по числу студентов.
• Криоконтейнер для заморозки клеток.
• Карандаш, блокнот для записей.
Поставленная задача
Подготовить клетки изучаемой клеточной линии для длительного хранения и провести их криоконсервацию.
Ход работы
1. Cнять клетки с поверхности флакона раствором трипсина*, как описано в Лабораторной работе 3.
*Переобработка трипсином может привести к снижению выживаемости клеток после заморозки.
2. Определить концентрацию клеток в суспензии, как описано в Лабораторной работе 3.
3. Перенести суспензию, содержащую 1 млн клеток, в пробирку для центрифугирования, осадить клетки центрифугированием 5 мин при 200 g (1000 об/мин на центрифуге практикума, см. калькуляторы с учетом радиуса ротора для пересчета об/мин <—> g).
4. Приготовить 10 мл раствора для замораживания следующего состава: FBS с добавлением 7 % DMSO. (Произвести расчеты в тетради.)
5. Подписать ампулы (пробирки объемом 2 мл с завинчивающимися крышками) для замораживания: дата, клеточная линия, пассаж, количество клеток, инициалы студента.
6. Из пробирки с клетками удалить супернатант, не затрагивая клеточный осадок.
7. Ресуспендировать клетки в 1 мл среды для замораживания с ДМСО и перенести в ампулу (пробирки объемом 2 мл с завинчивающимися крышками) для замораживания.
8. Охладить ампулы в ледяной бане не менее 5 мин (или в холодильнике при 4 °C).
9. Убрать клетки в холодный (4 °C) криоконтейнер* с изопропанолом.
*Клетки необходимо замораживать медленно – понижая температуру со скоростью ~1 °C в мин (возможно использование программируемого холодильника либо криоконтейнера или пенопластовой коробки с толщиной стенок ~1 см; контейнер или коробка помещается в морозильник при –70°–90 °C на 6–24 ч).
10. Поместить контейнер в низкотемпературный холодильник.
11. После замерзания ампул перенести их для хранения в жидкий азот (в пары) в криохранилище.
Полученные результаты
1. Протокол криоконсервирования клеточных линий.
2. Ампула с образцом клеточной линии длительного хранения.
Вопросы по теме
1. Для чего необходим криопротектор при криоконсервации клеток?
2. Почему при заморозке клетки должны охлаждаться медленно?
Перейти на стр:
Шрифт:
Продолжить читать на другом устройстве:
Новые книги
Смотреть все
[Исторические приключения / Приключения: прочее / Современная проза]
1766 год. В Форте Принца Уэльского, британском торговом форпосте, расположенном на севере Канады, идет прибыльная торговля с индейцами – шкуры в обмен на порох, табак и бренди. Но когда бродячий
0
[Биографии и Мемуары / Современная проза]
Леонид Юзефович – писатель, историк, лауреат премий «Большая книга», «Национальный бестселлер» и «Ясная Поляна». Автор документальных романов-биографий «Самодержец пустыни» о бароне Унгерне и «Зимняя
0
[Культурология / Документалистика]
Пико Айер живет в Японии более трех десятилетий, но, по его собственному признанию, эта страна продолжает оставаться для него загадочной. Обобщив свой опыт путешествий, бесед и размышлений, Айер
1
[Биографии и Мемуары / Документалистика]
Бесконечно тяжело создавать книгу о Горбачёве – слишком много эмоций вызывает эта фигура. Нет равнодушных по отношению к бывшему руководителю могучего Советского Союза. Отношение к нему полярное:
0
[Современная проза]
Нанако работает в культовом книжном магазине в Токио и разбирается в литературе, как никто другой. После тяжелого расставания с мужем она оказалась буквально на улице: пришлось ночевать в дешевых
0
[Детективы]
Счастливая и беззаботная жизнь топ-менеджера Павла Леднева круто меняется в один день, когда его увольняют с работы. Да и в сердечных делах не клеится. Неудачи по всем фронтам. Пытаясь собрать себя
0
[Детективы]
В райском местечке недалеко от Сочи произошло загадочное и очень изощрённое убийство. Под подозрением — все постояльцы небольшого элитного отеля. Классический детектив в духе Агаты Кристи раскрашен
0
[Детективы]
Лучшая книга года по версии «New York Times». Одна из лучших книг года по версии NPR, The New Yorker, Time, Chicago Tribune, BookPage, CrimeReads, and the Chicago Public Library. Экранизация от
0
[Фольклор: прочее / Культурология]
Армянская мифология – древний мир богов, героев и духов, рожденный на перекрестке цивилизаций Армянского нагорья. Здесь герой Айк поражает титана Бела одной стрелой, громовержец Ваагн сражается с
0
[Детективы / Криминальный детектив]
В новом детективе Сергея Венедова есть всё, что так любят поклонники этого жанра: закрученный сюжет, тайны, головоломки, яркие запоминающиеся характеры, эффектный финал. Для широкого круга читателей.
0
[Документалистика / Публицистика / Научпоп / Государство и право]
Принято считать, что глобализм и неолиберализм зародились на Западе, в Британии и США. Автор этой книги доказывает, что это ошибочное мнение. Реальные корни этих ужасающих учений лежат в Восточной
0
[Документалистика / Биографии и Мемуары / Научпоп]
Михаила Тухачевского часто называли «красным Бонапартом»: он сделал головокружительную военную карьеру — в 26 лет стал командующим армии, в 32 года — начальником штаба РККА, в 42 года — маршалом,
0
Самые популярные книги
[Попаданцы]
У Эвирейл Миардо нет ни единой свободной минутки на грусть и рефлексию! Да и когда? Столько дел, столько дел! Шахту выкопай, лавку открой, артефакты создай, эльфа за попу укуси... Ничего не
12
[Любовное фэнтези / Попаданцы]
- Двадцать четыре года, Веста. Наследника нет. Подпиши, и получишь Тиховодье. - А где это? - На краю Хляби. Тихо, сыро, никого. Утром я собирала клюкву в Мещёре и шагнула в болотное окно. Очнулась в
12
[Альтернативная история / Попаданцы / Самиздат / Боевая фантастика]
Редкий бой бывает похож на предыдущий. Мы учимся. На своих и на чужих ошибках. Стараемся расти над собой. Противник – тоже. Он анализирует наши ошибки, учитывает остроумные решения. То есть
9
[Попаданцы / Бояръ-Аниме / Русское фэнтези / Самиздат]
Пятьсот лет назад я была прославленным зельеваром, матриархом и почтенной основательницей династии. А сегодня очнулась в теле изнеженной барышни на пепелище семейной усадьбы и обнаружила, что весь
8
[Военное дело, спецслужбы / Медицина / Проза / Современная проза]
Вадим – хирург и микробиолог, попавший волей судьбы в Петербург 1904 года, в тело медицинского секретаря, работающего у богатого врача-мошенника. …Во дворах-колодцах тускло горят газовые фонари.
7
[Альтернативная история / Попаданцы / Исторические приключения / Самиздат]
Аннотация с первого тома: Умереть после спасения чужой жизни — не самый плохой финал для врача. Всю свою жизнь я посвятил медицине. Последняя операция стала для меня одновременно победой и
5
[Боевая фантастика / Боевое фэнтези]
Спасение цесаревича от пули принесло Александру титул, должность личного телохранителя и редкую магию стихий. Теперь он – правая рука наследника престола и командир его личного отряда особого
6
[Современные любовные романы]
— Как тебе… — слышу прерывистый голос подруги, — мой подарок в честь твоего дня рождения?По меньшей мере иду я в верном направлении. Но вот предчувствие не из лучших. Голос Светы перемешивается со
6
[Современные любовные романы]
- Скорее раздевайся, Ириша. Я до спальни не дойду. Прямо тут тебя сейчас... Охрипший от возбуждения голос мужа звучит в тёмной гостиной оглушительно громко. Не так я планировала начало
6
[Героическая фантастика / Любовное фэнтези]
Волны перемешивают гальку, жизнь перемешивает людские судьбы. Воины и рабы, дети Ардена и слуги Ириона, все равны перед вечностью. Казалось бы, все решено, расставлены фигуры и начата игра. Но
5
[Попаданцы / Книги про волшебников / Городское фэнтези / Самиздат]
Надо судить человека, прежде чем полюбил его, ибо, полюбив, уже не судят.
4
[Попаданцы / Альтернативная история / Самиздат]
Умереть в шестьдесят шесть, заслонив собой молодого стажёра, — достойный финал для оружейника. Очнуться в теле семнадцатилетнего подручного на Тульском оружейном заводе в 1866 году — уже второй
4
Самые комментируемые
[Героическая фантастика / Любовное фэнтези]
Волны перемешивают гальку, жизнь перемешивает людские судьбы. Воины и рабы, дети Ардена и слуги Ириона, все равны перед вечностью. Казалось бы, все решено, расставлены фигуры и начата игра. Но
5
[Любовная фантастика / Самиздат / Попаданцы]
Семь лет унижений, презрения и пустой постели. Герцог Дрейк Ашфорд объявил свою истинную жену бракованной и отправил в ссылку на Ольцег — умирать среди таких же «ненужных». Он думал, что сломал
22
[Любовная фантастика]
Каждая приличная драконица должна пройти отбор невест, иначе внукам у камина будет нечего рассказать. Так говорила моя маменька, а ей можно верить — за ее спиной аж четыре таких отбора! Так что я
14
[Любовная фантастика / Попаданцы]
— Скажи спасибо, что не оставил босой на улице, Верадель. Забирай свои проклятые северные руины и убирайся, — самодовольно бросил мне бывший муж, швырнув на стол бумаги о разводе. Он думал, что
25
[Любовное фэнтези / Попаданцы]
- Двадцать четыре года, Веста. Наследника нет. Подпиши, и получишь Тиховодье. - А где это? - На краю Хляби. Тихо, сыро, никого. Утром я собирала клюкву в Мещёре и шагнула в болотное окно. Очнулась в
12
[Любовное фэнтези / Попаданцы / Книги про волшебников / Самиздат]
Кто-то попадает в имбовых персов: Избранных, Тёмных властелинов и прочих крутых ребят. А я попала в тело бездарной адептки магической академии. Как она сюда поступила-то, без грамма магии? Неважно,
13
[Альтернативная история / Юмористическая фантастика / Попаданцы / Самиздат]
Пулеметчик — это не звание, это диагноз. Тридцать пять лет, пулемёт «Печенег», рукавица прилипла к раскалённому кожуху — и здравствуйте: июнь сорок первого, чужие двадцать два года, чужие руки,
10
[Самиздат / Детективная фантастика / Городское фэнтези / Юмористическая фантастика]
Некромантия в нашем мире давно стала такой же частью жизни, как радио, кино, телефоны и аэропланы. Но разве могла я подумать, что однажды приду наниматься на службу к лучшему некроманту столицы! Он —
18
[Детективы / Триллер / Любовное фэнтези / Фэнтези]
Приказ ясен: отравить Дерека вель Гранна. Последствия – костёр и пепел. Белладонна уже прошла этот круг, сгорела и получила второй шанс. Теперь она знает, что приказ – лишь верхушка заговора, в
4
[Попаданцы / Бояръ-Аниме / Русское фэнтези / Самиздат]
Пятьсот лет назад я была прославленным зельеваром, матриархом и почтенной основательницей династии. А сегодня очнулась в теле изнеженной барышни на пепелище семейной усадьбы и обнаружила, что весь
8
[Любовная фантастика / Попаданцы / Классическое фэнтези]
Удар копытом лошади рушит блестящие перспективы дебютантки. По мнению общества, хромота испортила не только плавную поступь девицы, но и характер! Это ж надо умудриться — вместо монастыря или
38
[Любовное фэнтези / Книги про волшебников / Попаданцы / Самиздат]
Новый Свет полон самых разных неожиданностей, как приятных, так и не очень. Новый Свет полон шикарных возможностей, только успевай их реализовывать. Новый Свет полон сильных мужчин и
11
Прямо сейчас читают
[Крутой детектив / Детективы]
Рене Реймонд, известный всему миру под псевдонимом Джеймс Хэдли Чейз, прославился в жанре «крутого» детектива. Он вышел из семьи отставного британского офицера, и отец прочил Рене карьеру ученого. Но
0
[Документалистика / Культурология / Новелла]
«Путешествие в Веймар» (1923) – документальные очерки Мариэтты Шагинян (1888-1982) о ее восьмидневном летнем паломничестве по гётевским местам в преддверии Первой мировой войны. Молодая писательница
0
[Современная проза]
Новая повесть Полины Брейтер отсылает читателя к проблемам религиозно-философским, решаемым на человеческом уровне и призванным примирить благость Божественного с существованием зла в мире.
0
[Самиздат / ЛитРПГ (LitRPG) / Постапокалипсис]
Первая книга: https://author.today/work/382885 Как там было в фильме: Упал, очнулся, гипс? Нет, не гипс, а… зомби! В моем случае я стал долбанным зомби! Внезапно, будто в какой-то
0
[Научная фантастика]
В результате дорожного происшествия у Майкла Слейда прорвалась кожа на лбу и оказалось, что там находится ...третий глаз. Это событие полностью изменило жизнь Слейда, т.к. «лишний» глаз предоставил
0
[Боевая фантастика / Киберпанк / Попаданцы / Самиздат]
ФИНАЛ Молодой - легендарный наемник Новой Москвы, победитель кровавого шоу "Проект Зомбицид" и человек, который не раз делал то, что считалось невозможным. Однако даже Легенды смертны. После
1
[Детективы]
В селении Уайт Ривер в годовщину убийства черного водителя полицейским неспокойно — происходят массовые волнения населения и поджоги. На фоне этой взрывоопасной ситуации, в городе появляется
0
[Современная проза]
Эта повесть – не придуманная история. В ней автор изменил всего два имени, но каждый сможет увидеть здесь и частичку своей жизни. Произведение признано лучшей прозой года и уже имеет свою
0
[Приключения: прочее / Русское фэнтези / Альтернативная история]
В холодное мартовское утро простой деревенский мальчик сталкивается с аномалией, навсегда изменившей его жизнь, и историю всего человечества, породив новую разумную расу, что появилась прямо у них
0
[Детективы]
Что происходит с врачом, когда у него на операционном столе умирает пациент? Любой, даже самый опытный специалист теряет опору и начинает сомневаться в себе. А если к тому же ушел муж, становится
0
[Попаданцы / Боевое фэнтези / Книги про волшебников]
Новые испытания для Стражей баланса. Красные пески. Столица Укути. Хитрая и безумная Атраски Выводок оборотней темного бога. И... Последняя тайна?
0