Начальные методы клеточной биологии: читать книгу онлайн полностью и бесплатно

• Иммерсионное масло.

• Жидкость для очистки стекол, салфетки.

Поставленные задачи

1. Приготовить микроскопические препараты живых дрожжевой (с прокрашиванием двумя красителями) и бактериальной клеточных культур методом раздавленной капли.

2. Изучить полученные препараты под микроскопом при двух увеличениях (40х и 100х).

3. Записать наблюдаемую микрокартину бактериальных клеток.

4. Зарисовать 4–5 клеток из окрашенных метиленовым синим и (на выбор) сафранином или малахитовым зеленым препаратов дрожжевых клеток при двух различных увеличениях.

Ход работы

1. На обезжиренное предметное стекло стерильной одноразовой или прокаленной металлической петлей нанести каплю стерильной воды, в которую той же петлей внести небольшое количество исследуемой культуры дрожжей, взятой с плотной питательной среды или отобранной из суспензии клеток.

2. В каплю жидкости на стекле с дрожжевыми клетками добавить петлей небольшое количество метиленового синего (до окрашивания в светло-голубой цвет) и тщательно перемешать.

3. Аналогично (см. пп. 1 и 2) приготовить препарат дрожжевых клеток, окрашенный сафранином или малахитовым зеленым.

4. Приготовленные на предметных стеклах препараты дрожжевых клеток S. сerevisiae накрыть покровными стеклами так, чтобы между каплей и стеклом не образовались пузырьки воздуха; излишки жидкости, выступающие из-под покровного стекла, осторожно убрать салфеткой. Приготовленные препараты рассмотреть в микроскоп с увеличением 40х, затем 100х. Зарисовать микрокартину (участок, содержащий 4–5 клеток), наблюдаемую при наибольшем увеличении.

5. Аналогичным образом (за исключением окрашивания) приготовить препарат бактериальных клеток E. coli, взятых с выросшей на плотной среде культуры трансформантов. Приготовленный препарат рассмотреть в микроскоп с увеличением 100х и записать наблюдаемое.

Полученные результаты

1. Микроскопические препараты дрожжевых клеток, окрашенных метиленовым синим и сафранином или малахитовым зеленым, приготовленные методом раздавленной капли.

2. Микроскопический препарат неокрашенных бактериальных клеток, приготовленный методом раздавленной капли.

3. Рисунок микрокартины 4–5 дрожжевых клеток из окрашенных метиленовым синим и сафранином или малахитовым зеленым препаратов при двух увеличениях (40х и 100х).

4. Запись о наблюдении микрокартины бактериальных клеток при максимальном увеличении (100х).

Вопросы по теме

1. Назовите способы, с помощью которых можно различить дрожжевые и бактериальные клетки, выросшие на поверхности чашки Петри.

2. Как различить живые и мертвые клетки дрожжевой культуры с помощью световой микроскопии?

3. Как готовят препарат культуры клеток методом раздавленной капли?

4. Каковы функции волютиновых гранул в дрожжевых клетках?

5. Назовите красители, которые используются для визуализации неживых клеток микроорганизмов.

Приложение

К Лабораторной работе 8. Световая микроскопия срезов тканей и культивируемых клеток млекопитающих. Ядро, клеточная стенка

Цель работы

Проанализировать структурную организацию клетки и цитоплазмы, определить ядро, клеточную стенку.

Объект

А. Слайд 5001c. Плоский эпителий, изолированные клетки изо рта человека.