Начальные методы клеточной биологии: читать книгу онлайн полностью и бесплатно

Лабораторная стеклянная посуда обладает химической и термической стойкостью, в том числе из-за перепада температур при автоклавировании.

В качестве расходника используют также пластиковую посуду. Ее материал не должен влиять на жизнедеятельность клеток, а для автоклавируемой посуды добавляется требование термостабильности. В частности, пробирки и другую посуду для культуральных работ из полипропилена, как правило, можно автоклавировать при 121 °C.

Большинство готовых растворов поставляется в стерильном виде. Для приготовления растворов и культуральных сред из сыпучих компонентов обычно используют чистую стеклянную или одноразовую посуду, а затем раствор стерилизуют автоклавированием (рис. 4) или фильтрацией в стерильную емкость.

Перед началом работы в ламинарном шкафу необходимо обработать вносимые предметы 70 %-ным спиртом, для этого обычно используют пульверизаторы, расположенные на рабочем столе у ламинарного шкафа.

Рис. 4. Автоклав с горизонтальной загрузкой: слева – закрыт, справа – открыт. А – манометр (автоклавирование идет при повышенном давлении); Б – таймер (типичное время автоклавирования – 30–60 мин); В – контроль температуры (автоклавирование идет при более 100 °C); Г – переключение: «Выкл» – «Контроль воды» – «Автоклавирование» – «Сброс остаточного давления/сушка»; Д – затвор емкости автоклавирования; Е – емкость для автоклавирования; Ж – риска контроля объема воды

Внутри ламинарного шкафа необходимо организовать свободное рабочее пространство и аккуратно расставить сбоку дозаторы разного объема, контейнеры с наконечниками, пинцеты и ножницы, ватные тампоны в контейнере.

Материалы и оборудование

• CO₂-инкубатор.

• Ламинарный шкаф.

• Центрифуга.

• Автоклав.

• Холодильник/морозильник.

• Автоматические дозаторы/микропипетки (0,2 мл, 1,0 мл, 5,0 мл).

• Расходные материалы:

– перчатки;

– культуральные флаконы (площадью 25 см², 75 см²);

– стерильные пробирки объемом 2 мл, 15 мл, 50 мл для центрифугирования клеток;

– нестерильный раствор для проведения лабораторной работы (физраствор или дистиллированная вода);

– стеклянные бутылки для приготовления растворов из химического стекла (автоклавируемые);

– наконечники для пипеток объемом 0,2 мл, 1,0 мл, 5,0 мл;

– раствор для дезинфекции/70 %-ный спирт (этанол).

Ход работы

I. Отработать перенесение жидкости* в нестерильных условиях.

*Обратите внимание на цветовую маркировку микродозаторов. На каждом указан максимально допустимый объем. Попытка набрать больше положенного чревата поломкой дозатора. Если нужен больший или меньший объем – смените дозатор!

1. Перенести 10 мл учебного раствора в новую пробирку.

2. Сменить пипетку и отмерить 5 мл, затем 3 мл, 1 мл, 500 мкл, 100 мкл, 20 мкл (микропипеткой), меняя дозаторы и настройки объема.

II. Начало работы в культуральном блоке.

1. Включить УФ-лампу в культуральном блоке для стерилизации не менее чем на 20 мин, затем отключить. Проветрить помещение в течение 5 мин. При входе в блок убедиться, что ультрафиолет отключен.

2. Войти в шлюз без верхней одежды, переобуться в чистую обувь/бахилы, надеть халат*.